十萬級無菌車間清潔驗證

清潔驗證相關的方法一般包括取樣方法與清潔樣品分析方法。取樣方法回收率代表了取樣設計的適用性和可靠性，而適當的分析方法應能夠充分檢測相關殘留物，檢測結果決定清潔程序是否可靠或需要進一步改進。

為了評估清潔效果，有必要對設備的產品接觸表面進行取樣并確定存在的殘留量，適當的取樣方法是一個清潔驗證計劃的基本要素，本節主要描述如何選擇適當的取樣方法及取樣回收率驗證問題。

（1）取樣方法選擇

取樣方法的選擇取決于殘留物的性質、殘留限度以及所需要的分析方法，清潔驗證常用的取樣方法包括:直接表面取樣法;淋洗取樣法；擦拭取樣法;微生物取樣法。

擦拭法、淋洗法以及目檢都是可以接受的取樣方法，這些方法有它們自身的優點與局限，在一個給定的驗證方案中，為了充分確認設備清潔是可接受的，可以采用多種取樣方法，例如“淋洗取樣與目檢結合”或者“淋洗取樣、擦拭取樣以及目檢相結合”。

①直接表面取樣法    直接表面取樣法包括儀器法及目檢法，應注意直接表面取樣法包括了取樣及分析方法。

a.目檢法    一個清潔過程應從生產設備表面去除可見殘留物，目檢存在局限性，如一些設備的表面（如管路）無法直接觀察，一些光學設備如鏡子或者內窺鏡，連同輔助照明一起有助于進行目檢。一般來說需要目檢的表面應干燥，因為這代表著目檢的較差條件。

b.儀器法    儀器法通常采用一個通過光纖由纜連接至分析儀器的表面探針。例如，可能是一個通過光纖電纜連接至傅里葉變換紅外光譜儀的衰減全反射探針。這種取樣法的優勢是不需要像擦拭法和淋洗法那樣從表面取殘留物進行分析（如擦拭以及淋洗取樣）。因此也不需要單獨的取樣回收率研究。這種方法的主要缺點是光纖探頭的長度有限以及被取樣表面需相對平坦（因此很多較差條件的位置不能采用這種方法取樣）。

②淋洗取樣法    淋洗取樣法是指在相關設備表面采用流動的溶劑（水、含水溶液、有機溶劑或者水/有機溶劑混合物）去除殘留物，然后再檢測淋洗液中殘留量，淋洗樣本的采集應考慮溶解度、位置、淋洗時間以及淋洗體積

③擦拭取樣法    拭子以及擦拭取樣都采用纖維材料（常用）擦拭表面，擦拭過程中表面的殘留物會被轉移到纖維材料上。然后冉將纖維材科置于溶劑中，將殘留物轉移到溶劑中去。然后用經過驗證的合適方法分析溶劑中旳殘留物。拭子的纖維材料是一種帶有塑料把手的紡織物（針織、機織或無紡布)。擦拭巾是機織或無紡布類的纖維材科，用來對表面進行手工取樣。用鉗子鉗住進行表面擦拭的棉球或棉墊是一種特殊尖型的拭子。選擇拭子或擦拭巾前需要評估拭子性質，如析出物和脫落物。表面殘留物的回收率還取決于拭子頭部或擦拭巾的大小和形狀以及把手的性質（例如彈性和長度）。

④微生物取樣法    生物負載取樣可采用淋洗或擦拭法，也可采用接觸碟法。應關注擦拭法以及淋洗法中的樣品溶液，對于擦拭法應采用無菌溶液，如磷酸鹽緩沖液。對于淋洗法，用無菌水對大型設備進行取樣一般是不現實的。然而對于小部件的提取取樣，首選使用無菌水或無菌溶液。對于大型設備一般選用純化水或注射用水進行淋洗取樣，結果需與同一用水點所取空白對照進行比較。生物負載的淋洗水取樣應使用無菌取樣容器，為了避免對樣品的污染，同潔凈室生物負載取樣相同，任何微生物取樣都需要采用無菌技術。

（2）取樣回收率驗證

取樣回收率驗證通常需要證明采用適當的分析方法和取樣程序，可充分測量或量化設備表面的殘留物。這些研究為殘留物測量的取樣以及分析方法建立提供了科學依據。它的目的是建立一個可重現的設備表面回收率。以下探討4種類型的取樣回收率：控拭取樣回收率、淋洗取樣回收率、目檢回收率以及生物負裁。對于擦拭以及淋洗取樣面言，回收率研究可以作為分析方法驗證的一部分，或者一旦確定分析方法能夠檢測溶減中殘留物，可單獨講行研空。取樣回收率研究是實驗室研究，需要不同被取樣設備材質（加不銹鋼、玻璃、PTFE 以及 EPDM) 試樣，并在上面涂布待檢測殘留物。

擦拭取樣回收率研究中，將已知濃度的殘留溶液均勻涂布在材質試樣上，自然晾干，采用一定的擦拭方法進行取樣，選用合適的溶劑提取棉簽上的殘留，然后檢測提取液中殘留物的數量。回收量與材質試樣上的加入量之比就是取樣百分回收率。由于擦拭屬于人工操作，通常每人需要重復3次回收率研究。每個殘留物和表面類型的組合至少需要兩個人進行擦拭回收率研究。研究建立的回收率可以通過不同的方式定義，但通常定義為任意一個擦拭取樣人員的較低平均回收率。一個可接受的拭子回收率取決于如何進行拭子回收率實驗。如果在回收率研究確認取樣方法時，沒有對殘留限度或分析結果進行修正，回收率通常要求70%或更高。如果回收率用于修正殘留物限度或分析結果，回收率一般要達到50%或以上。

②淋洗取樣回收率    淋洗取樣回收率研究同擦拭回收率相似，將目標殘留物溶液涂布在材質試樣上自然晾干。對于擦拭取樣的回收率,必須嚴格執行預定擦拭步驟，與之相反,對于淋洗取樣,無法在實驗室中準確地重復淋洗步驟（除了提取取樣的特殊情況）。然而在實驗室中模擬淋洗程序是可行的，在可能的情況下，模擬淋洗的條件應該同實際的設備淋洗條件相同,包括淋洗溶劑以及淋洗溶劑溫度的選擇。其他情況下,應該選擇與設備淋洗相同或較差的淋洗條件，例如回收率研究中溶劑量與被取樣表面積之比應該同設備淋洗時相同或更低。

③目檢回收率    這個過程實際上是確定一個定量的”目視檢測限”。如果目檢只是作為擦拭或沖洗取樣的補充，則可以但不要求確定“目視檢測限”。指定觀察條件下的目視檢測限可以通過在設備材質試樣上涂布不同濃度（ug/cm²）的殘留物來確定，并需要一組訓練有素的觀察者來確定表面殘留物明顯可見時的較低殘留水平。目視檢測限的意義在于，如果在清潔驗證方案中，在同樣（或更嚴格）的觀察條件下確定設備表面已目檢潔凈，則可認為實際殘留水平低于目視檢測限。適當的觀察條件包括距離、光照以及觀察角度。目視檢測限取決于殘留物性質、表面性質（例如，不銹鋼對PTFE) 以及觀察者的視力。

④生物負載取樣回收率    對于微生物取樣，不適合進行回收率研究以確定表面回收率，原因之一是微生物檢測的計數問題通常以“菌落形成單位”進行計數而不是單個微生物。第二個原因是在一個標準的取樣回收率研究中，當材質試樣晾干時微生物會失去生存能力。第三個原因是不清楚選用哪種微生物進行回收率研究。第四個原因是通常生物負載限度已明顯低于可能影響產品質量或工藝性能（如在線滅菌）的水平，因此即使回收率低（<50%)，不引入回收因子也不會影響產品質量和/或工藝性能。

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